Презентация "Гистотехника"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЛУГАНСКОЙ НАРОДНОЙ РЕСПУБЛИКИ Стахановский филиал ГОСУДАРСТВЕННОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ЛУГАНСКОЙ НАРОДНОЙ РЕСПУБЛИКИ «ЛУГАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ» «Стахановский медицинский колледж»   (СтФ ГУ ЛНР «ЛГМУ ИМ. СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ» «Стахановский МК»)

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

презентация для студентов III курса

специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика

МДК 05.01 Теория и практика лабораторных гистологических исследований

Подготовила: Кулик В.К. преподаватель

общепрофессиональных дисциплин

2022 г.

Пояснительная записка

Данная презентация подготовлена в соответствии с требованиями Государственного образовательного стандарта среднего профессионального образования Луганской Народной Республики для специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика, соответствуют требованиям рабочей программы ПМ.05 Проведение лабораторных гистологических исследований.

Презентация может использоваться на теоретических и практических занятиях.

Презентации являются дополнением к учебникам, лекционному материалу и атласу микроскопического и ультрамикроскопического строения клеток, тканей и органов.

Презентация рассчитана для студентов III курса специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика.

Материал будет полезен для подготовки к зачету по разделу «Гистотехника», для подготовки к экзамену квалификационному по ПМ.05 Проведение лабораторных гистологических исследований.

Современное оборудование гистологической лаборатории

Криостат

Микротомы

ротационный

санный

Гистобаня

Диспенсер

Термостаты на 37°С и 58°С

Тканевый гистологический процессор закрытого типа

Аппарат гистологической обработки (проводки) тканей.

Станция для заливки в парафин

Основные этапы приготовления гистологического препарата

• взятие материала;

• фиксация;

• обезвоживание и уплотнение;

• заливка;

• приготовление срезов;

• окрашивание;

• заключение срезов.

Фиксаторы

ПРОСТЫЕ:

СЛОЖНЫЕ:

• Формалин
• Ацетон
• Спирт
• Сулема

• Жидкость Буэна
• Солевой формалин
• Жидкость Карнуа

Все фиксаторы токсичны или ядовиты, требуют работы в вытяжном шкафу!

Ошибки при взятии материала и фиксации.

• Механическое повреждение образца.

Высыхание ткани без фиксатора

Замена формалина на чистый

Большой кусочек при вырезке

Недостаточное обезвоживание

Заливка материала

• Промежуточные среды для заливки материала:
• Хлороформ
• Ксилол
• Бензол
• Толуол
• Гексан и др.

• ЗАЛИВКА может быть в:
• Парафин
• Целлоидин
• Желатин
• Пропитку парафином проводят в термостате с температурой 58°С.

Все более широкое применение находят для заливки тканей синтетические смолы (аралдит, эпон и другие), особенно при изготовлении срезов для электронной микроскопии.

Неадекватно подобранная кассета

Вытекание парафина из кассеты

Ошибки при заливке

Нераспределённый парафин

Преждевременное застывание парафина

Ошибки при заливке

Монтаж среза на стекло

Ошибки при резке (разрыв ткани)

Повреждение среза дефектом ножа

Повреждение среза инструментами

Неполная депарафинизация

Обзорное окрашивание

Гистохимические окрашивания

• Гематоксилин-эозин
• Гематоксилин Эрлиха
• Железный гематоксилин Гейденгайна
• Железный гематоксилин Вейгерта
• Квасцовый кармин
• Сафранин
• Азур-2-эозин
• Железный гематоксилин-пикрофуксин по Ван-Гизону

• Специальные методы окраски для изучения структур клеточного ядра
• Методы окраски соединительной ткани
• Методы окраски нервной ткани
• Методы окраски костной ткани
• Выявление включений амилоида
• Выявление металлов
• Выявление гемоглобинсодержащих пигментов
• Выявление нейтрального жира
• Выявление углеводов

Окраска

прогрессивная

регрессивная

Прогрессивное окрашивание - это процесс при котором окраска идет до тех пор, пока не достигается интенсивное проникновение красителя в ткань. То есть время подбирается четко, без перекрашивания.

Регрессивное основано на первоначальном перекрашивании с последующей дифференцировкой до нужного уровня окраски.

Время окрашивания зависит от концентрации красителей.

Дифференцирование срезов в солянокислом спирте.

Окрашивание гематоксилином и эозином.

Окраска гематоксилин и эозин - наиболее распространенный метод окрашивания срезов.

Эта окраска является двойной: гематоксилин - основной краситель - окрашивает ядра клеток (фиолетовый цвет), эозин - кислый краситель - красит цитоплазму клеток (розовый цвет) и в меньшей степени - различные неклеточные структуры.

Гематоксилин представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке.

Эозин - искусственная краска.

Растворы красителей должны быть приготовлены заранее.

Гематоксилин сам по себе не является красящим веществом. Для того чтобы приготовить краску, гематоксилин подвергают окислению, в результате чего он превращается в красящее вещество - гематеин. В соединении с некоторыми солями гематеин дает четкое окрашивание ядер.

Окраска гематоксилин-эозин ( общий фон умеренно розовато-желтого цвета, ядра четко контурируются)

Загрязнение бактериями

Перекрашивание среза

Капельки воды в ткани

Заключение окрашенного среза в бальзам

Пузыри воздуха

Основные ошибки гистологической техники и дефекты, появляющиеся в их результате.

1. Дефекты аналитического этапа :

• Ошибки, допущенные при фиксации;
• Некачественная проводка;
• Ошибки при заливке;
• Дефекты микротомии;
• Неадекватная окраска.

2. Артефакты постаналитического этапа:

• Высыхание ;
• Вода в срезе;
• Выцветание препарата.

Артефакты при фиксации и уплотнении

Дефект

Устранение

Посмертная дегенерация – возникает при несвоевременной фиксации или при взятии очень крупных кусочков материала

Сморщивание - возникает при слишком длительной фиксации

Выпадение осадка (темно-коричневый пигмент в виде зернышек или глыбок) – при использовании кислого формалина, плохом удалении фиксаторов.

Чрезмерное уплотнение можно попытаться исправить, поместив кусочки ткани в 10% раствор лимонной кислоты на 1-2 часа.

Устранить нельзя.

Срезы помещают:

Недостаточная дегидратация- возникает при произвольном укорочении времени экспозиции в спиртах.

· в 1-5% раствор аммиака на 15-20 мин

· в 70% спирт на 15-20 мин

· в 1% раствор гидроксида калия в 80% спирте (1:25) на 10 мин

После чего срезы промывают водой и окрашивают.

Артефакты при изготовлении срезов

Дефект

Устранение

Парафин крошится. Слишком твердый.

• Медленно охлаждался при заливке.
• Большой угол наклона ножа.
• Низкая t° окруж. среды.

Ткань отделяется от парафина

Ткань белесая, срезы сморщенные, режется плохо-сморщиваются

• Неправильное охлаждения после заливки

• Подышать на блок (погреть)
• Сменить угол ножа.
• Перезолить в другой парафин.

• Перезолить заново!

• Попробовать провести в обратном последовательности для лучшего обезвоживания

Нож «проскакивает», режет только парафин

• Материал пересушен при обезвоживании (можно попробовать лед, но эффективность низкая)

Срезы прилипают к поверхности ножа

• Лед
• Требуется перезаливка

Полосы на срезе (зазубрены на ноже)

• Передвинуть

Артефакты при окрашивании

Дефект

Устранение

Неодастаточная депарафинизация

Неравномерная окраска - часть препарата окрашена нормально, а другая часть бледная.

Депозиты могут быть обусловлены нерастворёнными частицами красителя. Это является заводским браком

Недоокрашен препарат

Заменить краситель

Попробовать еще подержать в красителе

Перекрашен препарат

Провести дифференцировку соляно-кислым спиртом