Микробиологические исследования воздуха

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

ЛУГАНСКОЙ НАРОДНОЙ РЕСПУБЛИКИ

Стахановский филиал ГОСУДАРСТВЕННОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ЛУГАНСКОЙ

НАРОДНОЙ РЕСПУБЛИКИ «ЛУГАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ»

«Стахановский медицинский колледж»

(СтФ ГУ ЛНР «ЛГМУ ИМ.СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ» «Стахановский МК»)

Алгоритм лабораторных микробиологических исследований воздуха.

Учебное пособие для организации аудиторной и внеаудиторной самостоятельной работы по МДК 04.01 Проведение лабораторных микробиологических исследований

Специальность 31.02.03 Лабораторная диагностика

Стаханов 2022

Пояснительная записка

Один из основных принципов здравоохранения является профилактика, еще Н.И. Пирогов говорил: «Будущее принадлежит медицине предупредительной».

Основной задачей санитарной микробиологии является предупреждение возникновения инфекционных заболеваний, что достигается изучением экологии микроорганизмов, разработкой практических мероприятий по организации борьбы с инфекционными заболеваниями.

Для этого необходимо выделить патогенные микроорганизмы внешней среды: воды, почвы, воздуха.

Занимается этим бактериологическая лаборатория санитарной станции.

Работу по исследованию выполняют фельдшера лаборанты под руководством врача бактериолога.

Для проведения санитарно-микробиологических исследований существуют специальные государственные стандарты – ГОСТы, или методические указания по выполнению исследований из окружающей среды.

В данной работе представлены алгоритмы исследований воздуха, воды и смывов почвы, т.е. поэтапное определение патогенных возбудителей в воздухе, воде и смывов почвы.

Это облегчает работу по проведению исследований. Выделение чистой культуры кишечной и воздушно-капельной групп студенты изучили на предыдущих курсах по МДК 04.01.

Изучая санитарную бактериологию, студенты используют полученные раньше знания, для исследования воды, почвы, смывов, воздуха и работают по алгоритму исследования воды, почвы, смывов и воздуха.

Тема «Санитарная бактериология воздуха»

Санитарная бактериология занимается изучением микроорганизмов и процессов ими вызываемых в окружающей среде (вода, почва, воздух, пищевые продукты). Человек, живущий в окружающей среде, является неотъемлемой частью этих процессов, так как именно в его организме могут проходить процессы жизнедеятельности микроорганизмов и вызывать патологические изменения, то есть заболевания. Поэтому существует санитарная бактериология воды, почвы, воздуха, пищевых продуктов.

Цель занятия: Основной задачей санитарной микробиологии является предупреждение возникновения инфекционных заболеваний, что достигается изучением экологии микроорганизмов, разработкой практических мероприятий по борьбе с инфекционными болезнями.

Непосредственное выявление патогенных микроорганизмов во внешней среде представляет значительные трудности, так как они встречаются в ней постоянно и в малых количествах. Поэтому пользуются косвенными показателями зараженности окружающей среды – выявлением санитарно-показательных микроорганизмов.

Санитарно-показательными микроорганизмами являются постоянные обитатели поверхностей и полостей тела человека и животных, выделяющиеся з организма теми же путями, что и патогенные микроорганизмы. Поэтому, чем больше выявлено санитарно-показательных микроорганизмов, тем большая вероятность попадания в объекты внешней среды патогенных микроорганизмов.

Для каждого объекта внешней среды имеются определенные санитарно-показательные микроорганизмы – критерии оценки по бактериологическим показателям. Например, в отношении кишечных инфекций роль таких индикаторов принадлежит кишечным палочкам – постоянным обитателям кишечника человека и животных.

Для проведения санитарно-микробиологических исследований существуют специальные государственные общесоюзные стандарты – ГОСТы или методические указания, которые позволяют дать оценку соответствия выявленной в окружающей среде микрофлоры гигиеническим требованиям.

ГОСТы или методические указания предусматривают:

1. Правила отбора проб.

2. Количество взятого материала.

3. Условия транспортировки.

4. Методы исследования.

5. Цель исследования.

6. Критерии оценки полученных результатов.

К каждой отобранной пробе прилагают сопроводительный документ с указанием:

1. Название пробы (вода, почва, пищевые продукты и т. д).

2. Место взятия пробы и номер.

3. Дата (число, месяц, год, время).

4. Цель исследования.

5. Куда направляется проба для исследования.

6. Подпись лица, взявшего пробу.

Примечание. В некоторых случаях, например, при исследовании водных источников, почвы, отмечают метеорологические условия в момент взятия пробы.

Транспортировка отобранных проб всегда производится при температуре не выше 6 – 8⁰ С, чтобы не было размножения и гибели микроорганизмов. Такую температуру поддерживают с помощью резиновых мешков, зимой наполненных теплой водой, летом – льдом. Для перевозки и хранения взятых проб лучше пользоваться сумками-холодильниками или контейнерами со льдом.

В лаборатории полученные пробы регистрируют в журналах. Бактериологическое исследование должно проводиться не позднее 3 – 6 часов от момента взятия материала.

САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДУХА

Алгоритм исследования.

Среди факторов окружающей среды, влияющих на жизнь человека, воздух занимает ведущее место. Наука, изучающая микрофлору воздуха, называется аэромикробиологией.

Воздух не является благоприятной средой для развития микроорганизмов, так как не содержит питательных веществ и находится в постоянном движении. Поэтому большинство микроорганизмов быстро исчезают из воздуха. Однако некоторые из них более устойчивые, например, туберкулезная палочка, споры клостридий, грибов и другие, могут длительное время сохраняться в воздухе.

В воздухе городов микроорганизмов больше, чем в воздухе лесов и полей.

Количество микроорганизмов в воздухе с высотой уменьшается. Например, на высоте 500 м над Москвой в 1 м³ воздуха обнаруживают 2 – 3 бактерии, а на высоте 1000 м - вдвое меньше.

Количество микроорганизмов в помещениях обычно больше, чем в воздухе открытых мест.

ГОСТ не нормирует методы проведения исследования воздуха. Раньше большое внимание уделялось определению гемолитических стрептококков как показателей загрязнения воздуха закрытых помещений микрофлорой, находящейся в носоглотке человека. В настоящее время больше внимания уделяют непосредственному обнаружению в воздухе патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводят в плановом порядке: в больницах, операционных, детских учреждениях и др.

При санитарно-бактериологическом исследовании определяют:

• Общее количество бактерий в 1 м³ воздуха.

• Наличие патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в 1 м³ воздуха.

Выявление микроорганизмов в воздухе проводится при помощи специальных приборов и специальных сред (диагностических и дифференциально-диагностических).

МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ ВОЗДУХА

Существуют два основных способа отбора проб воздуха для исследования: 1) седиментационный - основан на механическом оседании микроорганизмов; 2) аспирационный - основан на активном просасывании воздуха (этот метод дает возможность определить не только качественное, но и количественное содержание бактерий).

СЕДИМЕНТАЦИОННЫЙ МЕТОД

Чашки Петри с питательной средой (МПА) устанавливают в открытом виде горизонтально, на разном уровне от пола. Метод основан на механическом оседании бактерий на поверхность агара в чашках Петри. Чашки со средой экспонируют от 10 до 20 мин, в зависимости от предполагаемого загрязнения воздуха. Для выявления патогенной флоры используют элективные среды. Экспозиция в этих случаях удлиняется до 2 – 3 ч. после экспозиции чашки закрывают, доставляют в лабораторию и ставят в термостат на 24 часа при температуре 37⁰ С. На следующий день изучают выросшие колонии. Метод это используют в основном в закрытых помещениях.

АСПИРАЦИОННЫЙ МЕТОД

Бактериоуловитель Речменского. Перед работой прибор заполняют стерильной содой. Действие прибора основано на протягивании через него воздуха с помощью аспиратора. При этом происходит распыление находящейся в приборе жидкости. После окончания просасывания жидкость, через которую был пропущен воздух, засевают по 0,1 – 0,2 мл на МПА в чашках Петри. При необходимости использовать элективные среды посевную дозу увеличивают (0,3 – 0,5 мл). Полученная в приемнике жидкость может быть использована для заражения животных (например, при исследованиях, проводимых для выявления вирусов, риккетсий и т. д.).

Прибор Дьяконова также основан на улавливании бактерий в жидкости, через которую пропущен воздух.

Прибор ПАБ - 1 предназначен для бактериологического исследования больших объемов воздуха в течение короткого промежутка времени. Получение проб воздуха производят со скоростью 125 – 150 л/мин. Принцип работы прибора основан на улавливании микроорганизмов на электрод противоположного заряда. Большая скорость отбора проб воздуха в этом приборе и возможность посева его на различные питательные среды имеет значение для обнаружения патогенных и условно-патогенных бактерий (например, синегнойной палочки в хирургических отделениях).

Аппарат Кротова. Действие основано на принципе удара струи воздуха на среду в чашках Петри. Аппарат состоит из трех частей: узла для отбора проб воздуха, ротаметра, электрической части питающего механизма.

Исследуемый воздух при помощи центробежного вентилятора, вращающегося со скоростью 4000 – 5000 об/мин, засасывается в щель прибора и ударяется о поверхность открытой чашки Петри со средой. Содержащиеся в воздухе микроорганизмы оседают на питательный агар. Для равномерного распределения микроорганизмов по всей поверхности столик с находящейся на нем чашкой вращается. Из прибора воздух выводится через воздухопроводную трубку, которая соединена с ротаметром, показывающим скорость протягивания воздуха через прибор.

Недостатком прибора Кротова является то, что он нуждается в электроэнергии, поэтому не во всех условиях может быть использован.

Первый день исследования

Отобранные пробы помещают в термостат при 37⁰ С на 18 – 24 часа.

Второй день исследования

Чашку вынимают из термостата и производят подсчет колоний. Бактериальное загрязнение воздуха выражается общим числом микробов в 1 м³ его.

Расчет. Например, за 10 мин пропущено 125 л воздуха, на поверхности выросло 100 колоний.

Число микробов в 1 м³ воздуха = 100 х 1000 / 125 = 800

Для определения золотистого стафилококка забор производят на желточно-солевой агар. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 37⁰ С в течение 24 ч и 24 ч выдерживают при комнатной температуре для выявления пигмента. Колонии, подозрительные на S. aureus, подлежат дальнейшей идентификации.

В детских учреждениях воздух проверяют на наличие сальмонелл. Для этого воздух засевают в чашку со средой висмут-сульфитный агар.

Выявление патогенных бактерий и вирусов в воздухе закрытых помещений проводят по эпидемиологическим показаниям. Для выявления возбудителей туберкулеза пользуются прибором ПОВ, в качестве улавливающей используется среда Школьниковой.

Подведение итогов лабораторных исследований воздуха.

Рассчитайте количество колоний в 1 м³ воздуха, за 10 мин пропущено 300 л воздуха. Дать заключение и сделать выводы.